Quy trình kiểm tra Salmonella

ISO 6579-1:2017, TCVN 10780-1:2017

• Buffered Peptone Water (BPW)
• Rappaport-Vassiliadis (RV) broth
• Muller-Kauffmann Tetrathionate-Novobiocin (MKTTn) broth
• XLD (Xylose Lysine Deoxycholate agar)
• BGA (Brilliant Green Agar)
• Salmonella Chromogenic Agar
• Hektoen Enteric Agar
• Salmonella Shigella Agar
• XLT4 Agar
• Selenite Cystine Broth
• Bismuth Sulfite Agar
• Tetrathionate Broth

1. Lấy mẫu và chuẩn bị mẫu

• Thu thập mẫu thực phẩm (thịt, trứng, sữa, rau củ, hải sản, nước…) theo quy trình lấy mẫu chuẩn.
• Cân 25g mẫu thực phẩm, đồng nhất trong 225ml môi trường đệm Buffered Peptone Water (BPW).
• Lắc đều và để yên trước khi thực hiện bước tiếp theo.

2. Tiền môi trường tăng sinh không chọn lọc (Pre-enrichment)

• Môi trường sử dụng: Buffered Peptone Water (BPW).
• Ủ ở 37°C trong 18-24 giờ.
• Mục đích: Giúp hồi phục tế bào Salmonella nếu có trong mẫu.

3. Tăng sinh chọn lọc (Selective enrichment)

• Chuyển 0,1ml dịch BPW sang 10ml Rappaport-Vassiliadis (RV) broth, ủ 41.5°C trong 24 giờ.
• Chuyển 1ml dịch BPW sang 10ml Muller-Kauffmann Tetrathionate-Novobiocin (MKTTn) broth, ủ 37°C trong 24 giờ.

4. Cấy phân lập trên môi trường chọn lọc

• Môi trường XLD (Xylose Lysine Deoxycholate agar):
  • Salmonella spp.: Khuẩn lạc màu hồng hoặc đỏ, có tâm đen (H2S dương tính).
  • Các vi khuẩn khác: Lên màu vàng hoặc không có tâm đen.
• Môi trường BGA (Brilliant Green Agar):
  • Salmonella spp.: Khuẩn lạc màu đỏ hoặc hồng nhạt.
• Ủ 37°C trong 24 giờ.

5. Kiểm tra sinh hóa

• Thử nghiệm Oxidase: Âm tính (-).
• Thử nghiệm TSI (Triple Sugar Iron Agar):
  • Chuyển màu đỏ/vàng, sinh H2S (tạo màu đen).
  • Không sinh khí hoặc sinh khí nhẹ.
• Thử nghiệm Urease: Âm tính (-).
• Thử nghiệm Lysine Iron Agar (LIA): Dương tính (+).
• Định danh bằng hệ thống API 20E hoặc VITEK nếu cần.

6. Xác nhận bằng PCR hoặc ELISA (nếu cần)

• Dùng PCR để phát hiện các gene đặc hiệu của Salmonella spp..
• ELISA có thể sử dụng để phát hiện kháng nguyên Salmonella.

7. Khẳng định và báo cáo kết quả

• Nếu phát hiện Salmonella spp., cần so sánh với tiêu chuẩn an toàn thực phẩm hiện hành.
• Báo cáo kết quả và có thể cần gửi mẫu đến phòng thí nghiệm tham chiếu để kiểm tra lại.